LPCB - DiBEST
Il Laboratorio di Preparazione di Campioni Biologici (LPCB) si occuperà della produzione di singole proteine e di complessi proteici umani mediante biotecnologie basate su espressione in sistemi eterologhi come batteri e lieviti. A tale scopo, il laboratorio svolgerà attività di ricerca basata sull’ottimizzazione di procedure di clonaggio e di espressione in microrganismi di proteine e di complessi proteici con struttura ancora non identificata. Particolare attenzione sarà dedicata ad una classe di proteine che riveste attualmente una grande importanze scientifica per due principali ragioni: 1) sono ancora poco note a livello strutturale; 2) sono coinvolte in patologie umane molto diffuse come il cancro ed il diabete e rappresentano nuovi e più specifici bersagli farmacologici. Si tratta della super-famiglia SLC (SoLute Carriers) che include più di 500 membri nell’uomo, che attualmente sono oggetto di investimenti in ricerca e studi su larga scala.
- Ultracentrifuga
- Armadio congelatore
- Ultracongelatore verticale
- Centrifughe refrigerate ce-ivd
- Shaker incubatore
- Microcentrifuga refrigerata
- Bidistillatore
- Sistema pc-based di acquisizione e analisi immagini in chemiluminescenza e visibile
- Microscopio rovesciato
- Spettrofotometro
- Clonaggio cDNA in plasmidi d’espressione.
Amplificazione e clonaggio di cDNA codificanti proteine di trasporto umane (fino a 2 Kb). - Espressione eterologa di proteine di trasporto umane.
Studio delle condizioni di espressione di proteine umane in sistemi eterologhi (batteri, lieviti). Ottimizzazione del carico metabolico e delle condizioni di crescita dei microrganismi (composizione del terreno di coltura, temperatura, IPTG). - Purificazione di proteine di trasporto.
Purificazione delle proteine over-espresse in microrganismi mediante appropriate procedure cromatografiche. - Preparazione di campioni biologici.
Estrazione di DNA e RNA da cellule eucariotiche e da microrganismi. Preparazione di campioni di siero/plasma e isolamento di PBMC da sangue. - Creazione e mantenimento delle relative bio-banche.
Conservazione dell’intera collezione dei campioni biologici a -80°C e a -20°C - Stoccaggio delle colture cellulari.
Conservazione di linee cellulari eucariotiche e ceppi batterici a -80°C in opportuni mezzi di congelamento - Valutazione della qualità di linee cellulari umane.
Autenticazione di linee cellulari umane attraverso la determinazione del profilo STR di campioni di DNA. Controllo delle linee cellulari della presenza di contaminazioni da micoplasma.
LPCB – Laboratorio di Preparazione Campioni Biologici
